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送風中微生物檢驗方法

本附錄規(guī)定了集中空調(diào)通風系統(tǒng)送風中細菌總數(shù)、真菌總數(shù)和b-溶血性鏈球菌的檢驗方法。

D1 送風中細菌總數(shù)

D1.1原理

用儀器法采集集中空調(diào)通風系統(tǒng)送風中的細菌，計數(shù)在營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上經(jīng)35~37℃、48小時培養(yǎng)所形成的菌落數(shù)，以每立方米空氣中菌落形成單位（cfu/m3）報告。

D1.2 方法與要求

D1.2.1采樣點：一般設在距送風口下風方向15~20cm處。

D1.2.2 采樣環(huán)境條件：采樣時集中空調(diào)通風系統(tǒng)必須在正常運轉(zhuǎn)條件下，并關(guān)閉門窗1小時以上，盡量減少人員活動幅度與頻率，記錄室內(nèi)人員數(shù)量、溫濕度與天氣狀況等。

D1.2.3 采樣方法

以無菌操作，使用六級篩孔空氣撞擊式采樣器，以空氣流量為28.3L/min，在采樣點采集5-15min。

D1.3 培養(yǎng)

D1.3.1 營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基

成分：         蛋白胨                10g

                   氯化鈉                 5g

                   肉膏                   5g

                   瓊脂                  20g

                   蒸餾水             1000ml

制法：將蛋白胨、氯化鈉、肉膏溶于蒸餾水中，校正pH值為7.2～7.6，加入瓊脂，121℃ 20min滅菌備用。

D1.3.2 方法：將采集細菌后的營養(yǎng)瓊脂平皿置35~37℃培養(yǎng)48小時，計數(shù)菌落數(shù)，記錄結(jié)果并換算成cfu/m3。

D2 送風中真菌總數(shù)

D2.1 原理

用儀器法采集集中空調(diào)通風系統(tǒng)送風中的真菌，計數(shù)在沙氏瓊脂培養(yǎng)基上經(jīng)28℃、5～7天培養(yǎng)所形成的菌落數(shù)，以每立方米空氣中菌落形成單位（cfu/m3）報告。

D2.2方法與要求

D2.2.1采樣點與D1.2.1款要求相同。

D2.2.2 采樣環(huán)境條件：采樣時集中空調(diào)通風系統(tǒng)必須在正常運轉(zhuǎn)條件下，并關(guān)閉門窗1小時以上，盡量減少人員活動幅度與頻率，記錄室內(nèi)裝修狀況、人員數(shù)量、溫濕度與天氣狀況等。

D2.2.3 采樣方法同D1.2.3

D2.3 培養(yǎng)

D2.3.1 沙氏（Sabourand’s agar）瓊脂培養(yǎng)基

成分：         蛋白胨                10g

                   葡萄糖                40g

                   瓊脂                  20g

                   蒸餾水             1,000ml

制法：將蛋白胨、葡萄糖溶于蒸餾水中，校正pH值為5.5～6.0，加入瓊脂，115℃ 15min滅菌備用。

D2.3.2方法：將采集真菌后的沙氏瓊脂培養(yǎng)基平皿置28℃培養(yǎng)5~7天，逐日觀察并于第7天記錄結(jié)果。若真菌數(shù)量過多可于第5天計數(shù)結(jié)果，并記錄培養(yǎng)時間，換算成cfu/m3。

D3 送風中b-溶血性鏈球菌

D3.1  原理

用儀器法采集集中空調(diào)通風系統(tǒng)送風中的b-溶血性鏈球菌，經(jīng)35～37℃，24～48小時培養(yǎng)，在血平皿平板上形成典型菌落的為b-溶血性鏈球菌。以每立方米空氣中菌落形成單位（cfu/m3）報告。

D3.2 方法與要求

D3.2.1采樣點與D1.2.1款要求相同。

D3.2.2 采樣環(huán)境條件：采樣時集中空調(diào)通風系統(tǒng)必須在正常運轉(zhuǎn)條件下，并關(guān)閉門窗1小時以上，盡量減少人員活動幅度與頻率，記錄室內(nèi)人員數(shù)量。

D3.3 培養(yǎng) 

D3.3.1 血瓊脂平板

成分：                蛋白胨                10g

                            氯化鈉                 5g

                            肉膏                   5g

                            瓊脂                  20g

                            脫纖維羊血         5~10 ml

                            蒸餾水             1,000ml

制法：將蛋白胨、氯化鈉、肉膏加熱溶化于蒸餾水中，校正pH值為7.4~7.6，加入瓊脂，121℃ 20min滅菌。待冷卻至50℃左右，以無菌操作加入脫纖維羊血，搖勻傾皿。

D3.3.2 方法：采樣后的血瓊脂平板在35～37℃下培養(yǎng)24～48h。

D3.4 結(jié)果觀察

培養(yǎng)后，在血平皿平板上形成呈灰白色，表面突起直徑0.5~0.7mm的細小菌落，菌落透明或半透明，表面光滑有乳光；鏡檢為革藍氏陽性無芽孢球菌，圓形或卵圓形，呈鏈狀排列（視培養(yǎng)與操作條件影響鏈可短可長4~8個細胞至幾十個細胞）；菌落周圍有明顯的2～4mm界限分明、完全透明的無色溶血環(huán)。符合上述特征的菌落為b-溶血性鏈球菌。